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hiv核酸检测

hiv其实就是艾滋病了，艾滋病目前还是没有什么办法可以治愈的，因此艾滋病是比较严重的疾病，对于艾滋病，首先要检查出来才行，早点检查出来早点控制，还能稍微活的久一点，可以通过hiv核酸检测来确诊，接下来我们具体了解下hiv核酸检测的情况吧。

hiv核酸检测多久出结果

怀疑有hiv可以进行hiv核酸检测来知道，那么hiv核酸检测多久出结果呢？

hiv核酸检测其实就是艾滋病的核酸检测，关于hiv核酸检测通常需要1周左右才能出结果，hiv核酸检测是通过PCR的方法检测患者血液当中是否存在HIV-RNA以及HIV-RNA的高低，检测相对来说比较准确，在感染HIV之后7-10天就可以在感染者的体内检测到HIV-RNA。

因此，在我们国家对于血液的检疫都会通过艾滋病的核酸检测，明确献血者是否感染艾滋病。对于确诊患者也会进行艾滋病的核酸检测，明确患者病毒量的高低，同时一旦确诊之后应当立即开始抗病毒治疗，在抗病毒治疗期间也应当进行艾滋病的核酸检测，明确治疗效果。

hiv核酸检测是什么

核酸检测有几种，其中一种就有hiv核酸检测，那么hiv核酸检测是什么来的呢？

HIV核酸检测，可直接检查HIV RNA，可在发现血清学变化之前检测HIV感染，而且比P24抗原检测方法更灵敏。艾滋病核酸检测是最准确的一种检测方法，核酸检测就是使用PCR的方法，检测患者血液中是否存在艾滋病的病毒。普通人感染HIV后，5天左右血液中就会出现HIV病毒，7-10天通过HIV-RNA的检测，就可以在感染者体内检测到病毒的存在，从而确诊。

不光是核酸检测可以对患者进行确诊，还可以通过HIV的抗原、抗体联合检测去进行确诊，但是抗原、抗体联合检测在感染HIV后的2-3周左右才能够检查出来。不管是哪种方法，一旦确诊有感染HIV，都应当尽快的使用抗病毒药物进行治疗，从而避免患者进展到艾滋病期。

hiv核酸检测多久可以完全排除

hiv核酸检测结果通常是准确的，那么hiv核酸检测多久可以完全排除呢？

性行为可能会感染HIV。HIV核酸检测可以直接检测体内艾滋病病毒的RNA。当感染HIV后，HIV核酸检测是最早能发现病毒感染的。可以缩短HIV的检测空窗期到两周左右。但建议在三个月后复查，排除感染HIV。

对于HIV感染产妇所生婴幼儿在出生后18个月内可应用HIV核酸（DNA或RNA）检测进行早期HIV感染诊断。尽管HIV RNA检测敏感性在感染早期较高（出生后1个月内），但是HIV DNA检测不受母亲围产期抗逆转录病毒治疗和人乳汁中抗逆转录病毒药物以及婴幼儿预防性抗逆转录病毒治疗的干扰而影响早期诊断。另外，考虑母亲血液污染因素，不推荐使用脐带血进行HIV核酸检测。

hiv核酸检测和病毒载量

hiv核酸检测和病毒载量是有一定关系的，那么hiv核酸检测和病毒载量什么样呢？

艾滋病病毒载量与艾滋病核酸检测是一回事，没有不同，都是查病毒量的。如果确实患有HIV感染，服用抗病毒治疗药物以后。是必须要查病毒载量的。低于1000是正常的，高精病载是20以下正常。

病毒载量检测是通过一种叫聚合酶链锁反应（PCR）的技术完成的，病毒载量简单的说就是通过测量从而显示每毫升血液里病毒的数量。艾滋病病毒载量测定是通过一种叫聚合酶链式反应（PCR)的技术，来测定血液中HIV RNA的量。病毒载量以拷贝（copies)数为单位，计算每一毫升(ml)有多少病毒量，如copies/ml。若病毒量在100 copies/ml以下是“低，100 000copies/ml以上“高”。

怎么检测艾滋病？

一、艾滋病检测方法有:

1.通过免疫的方法，即通过机器来自动检测HIV抗体，具有使用简单、应用广泛。即是快速诊断法。

2.通过唾液、尿液、口腔粘膜等分泌物来检测，这种检测方法敏感性、特异性都非常好。

二、艾滋病检测步骤:

（1）艾滋病检测首先进行的是抗体初筛检测，若初筛检测为“阳性”，一定要进一步做确证试验，才能确诊。

（2）常用筛查试验方法包括酶联免疫吸附实验、化学发光实验、免疫荧光实验、快速检测实验。也可以使用抗原抗体筛查实验.

（3）筛查试验阳性不是最终结果，需要进一步确证，常用方法包括抗体免疫印迹实验、条带或线性免疫试验，也可用核酸试验进行确证，有定量和定性试验。

核酸检测是怎么检测

核酸检测是通过磁分离技术将病毒核酸分离，可检查艾滋病、乙肝或丙肝，还可用于新冠病毒的检查。核酸检测是采用PCR扩增方法进行检测血液中是否存在病毒核酸，是利用磁珠上标记特异性吸附特异性核酸，然后在通过磁分离技术将病毒核酸分离出来，适合用来检查艾滋病、乙肝或者丙肝等疾病的感染。核酸检查是准确度比较高，灵敏度高的医学方法，但是核酸检查的成本高，需要去三甲医院才可以进行检查，而且核酸检查适合于目前的新冠状病毒感染者，可以及时的区分出患者。

艾滋病检测方法，艾滋病检测方法都有哪些？

常用，通过免疫的方法检测，即通过一个机器来自动检测这种抗体；通过尿液、唾液、口腔粘膜等分泌液检测（一）抗体检测主要有酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA）。ELISA用去污剂裂解HⅣ或感染细胞液提取物作抗原，IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测，如果发现阳性标本应重复一次。为防止假阳性，可做Westernblot（WB，蛋白印迹法）进一步确证。

WB法是用聚丙烯酰胺凝胶电泳将HⅣ蛋白进行分离，再经传移电泳将不同蛋白条

带转移于硝酸纤维膜上，加入病人血清孵育后，用抗人球蛋白酶标抗体染色，就能测出针对不同结构蛋白抗体，如抗gp120、gp41、P24抗体，特异性较高。

快速检测法，也称为金标法，也是抗体检测的一种方法，根据免疫层析法的原理，用于HⅣ抗体检测的定性检测。

（二）抗原检测

用ELISA检测P24抗原，在HⅣ感染早期尚未出现抗体时，血中就有该抗原存在.由于P24量太少，阳性率通常较低。现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原，来提高敏感性。

（三）核酸检测

用PCR法检测HⅣ基因，具有快速、高效、敏感和特异等优点，目前该法已被应用于HⅣ感染早期诊断及艾滋病的研究中。

（四）病毒分离

常用方法为共培养法，即用正常人外周血液分离单个核细胞，加PHA刺激并培养后，加入病人单个核细胞诊断及艾滋病的研究中。

（五）检测试纸检测

艾滋病检测试纸条是使用胶体金免疫层析科技研发的新一代检测试剂。它可检测血清或血浆标本中的HⅣ-1/2特有性抗体。所有操作时间若是15分钟，动作简便、迅速、准确、自带质

控对照、无需所有附加药剂。适合个人检测，也适合各大医院，疾控中心检测。

HIV核酸检测的HIV核酸检测方法及程序

1.1 方法和试剂

1.1.1 方法

（1）检测方法为商品化试剂盒和实验室自建方法，商品化试剂应严格按说明书操作。下面介绍的方法是实验室自建方法，供参考。

（2）检测血浆或血清样品使用逆转录PCR（RT-PCR）方法，建议第一轮PCR扩增使用RT-PCR一步法；检测血细胞或组织样品使用PCR方法。一般使用扩增两轮的套式PCR方法。

（3）设立阳性、阴性及空白对照。阳性对照为与待测样品同质、含有目的基因的样品；阴性对照为与待测样品同质、不含有目的基因的样品。阳性和阴性对照样品应与待检样品处理程序一致。阴性对照的设置数量应根据实验样品的数量设置在不同的位置。

1.1.2 试剂

（1）PCR引物：一般使用扩增HIVgag和/或pol和/或env和/或LTR等引物。进行RNA逆转录时可使用下游特异性引物或随机引物。引物设计可参考文献或自行设计，应尽量涵盖常见的HIV流行毒株，也可使用兼并性引物。

（2）主要试剂：包括核酸提取纯化、逆转录、PCR所需的试剂。使用商品化核酸提取纯化试剂、逆转录酶反应试剂和PCR扩增试剂。

（3）抗污染试剂：实验室自建检测方法可使用抗污染试剂，参考尿嘧啶DNA糖基化酶抗污染方法。

1.2 扩增目的基因片段

1.2.1 样品的采集和处理

1.2.2 核酸提取

可使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。

1.2.3 逆转录合成cDNA

使用商品化试剂并按说明书操作。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。建议使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。

1.2.4 PCR扩增反应

使用商品化试剂按说明书操作。PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板（DNA或cDNA）。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。一般使用二次扩增的套式PCR扩增方法。

1.3 扩增产物分析及结果报告

1.3.1 扩增产物分析

扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。自动化核酸扩增仪使用酶联比色分析或荧光探针杂交等原理测定。

1.3.2 结果判定和报告

（1）实验成立的条件：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。

（2）HIV核酸检测阳性：使用商品化检测试剂，发现核酸阳性反应，应该重复采集样品进行复测，复测结果呈核酸阳性反应则判定为核酸阳性，复测结果为核酸阴性反应则判为不确定结果，需进一步随访检测。

（3）HIV核酸检测阴性：只可报告本次实验结果阴性。

（4）应在完成检测后7个工作日内发出检测报告。 2.1 方法

HIV核酸定量检测主要基于靶核酸扩增RT-PCR和信号放大扩增两种方法。国内常用的方法中，NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1采用国际单位（IU/ml），与NASBA的拷贝数关系基本为1:1；Amplicor Cobas 的拷贝数约为1.2～1.5国际单位；bDNA方法的拷贝数约为0.8～1.0国际单位。不同方法的关系与HIV的亚型有关。

2.2 试剂

必须使用经中国药品生物制品监督管理局注册批准的商品化试剂并严格按说明书操作。

2.2.1 靶核酸扩增试剂和性能

（1）RT-PCR扩增试剂

1）Amplicor HIV-1 Monitor v1.5（RT-PCR微孔板捕获比色分析法），核酸手工提取（异丙醇沉淀），比色分析测定。扩增靶核酸位置是gag基因区，可扩增HIV-1M组的A-H基因亚型。标准法的检测线性范围是400～750，000；超敏法的线性范围是50～100，000 RNA拷贝/毫升。

2）COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5, 核酸手工提取（异丙醇沉淀），仪器测定。扩增靶核酸位置是gag基因区，可扩增HIV-1M组的A-H基因亚型。标准法的检测线性范围是400～750，000；超敏法的线性范围是50～100，000 RNA拷贝/毫升。

3）COBAS AmpliPrep/COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 （COBAS Amplicor 分析仪）,仪器提取核酸，仪器测定。扩增靶核酸位置是gag基因区，可扩增HIV-1M组的A-H基因亚型。标准方法的检测线性范围是400～1，000，000；超敏方法的线性范围是50～100，000 RNA拷贝/毫升。

以上三种试剂均采用基于PCR扩增靶核酸检测法，仅在设备的使用、自动化程度和样品制备的方法有所不同。

4）COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test（实时荧光探针RT-PCR分析法）, 仪器提取核酸,实时荧光探针PCR扩增仪器测定。扩增靶核酸位置是gag基因区，可扩增HIV-1M组的A-H基因亚型。检测线性范围是40～10，000，000 RNA拷贝/毫升，比上述三种方法的检测线性范围要宽，样品可不经稀释一次完成检测。

以上四种试剂均使用一个内部定量标准品，1个阴性、1个弱阳性和1个强阳性外部外部质控品。均使用dUTP/UNG防污染试剂。

5）LCx HIV RNA Quantitative Assay（竞争性RT-PCR微颗粒酶免疫分析法）,手工或仪器提取核酸（活化硅胶柱纯化），仪器测定。扩增靶核酸位置是pol（整合酶）基因区，可扩增HIV-1基因M组的A-G亚型和0组病毒，尤其可检测M组C基因亚型和一些重组病毒。检测线性范围是50～1，000，000 RNA 拷贝/毫升；使用一个内部定量标准品和六个外部定量标准品。

6）RealTime HIV-1 Assay（实时荧光探针RT-PCR分析法）,使用独特的双链荧光探针。手工或仪器提取核酸（磁性颗粒纯化），仪器测定。扩增靶核酸位置是pol（整合酶）基因区，扩增HIV-1基因亚型是M组的A-G亚型和0组以及N组病毒。检测线性范围是40～1，000，000 RNA 拷贝/毫升。使用一个内部定量标准品。检测结果与LCx HIV RNA Quantitative Assay结果高度相关。

（2）基于核酸序列扩增试剂（NASBA扩增技术）：以等温方式直接扩增HIV-1 RNA。

NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1（实时荧光探针分析法）, 使用荧光标记的分子信标探针技术检测扩增子。手工或仪器提取核酸（硅胶纯化，异丙醇沉淀）,仪器测定。扩增靶核酸位置是gag基因区，扩增HIV-1基因亚型是M组的A-G亚型。检测线性范围是50～3，000，000 RNA 国际单位/毫升；使用一个内部定量标准品，没有阴阳性外部外部质控品。每次检测8的整数倍样品，直至48个。检测结果与Versant HIV-1 RNA、和Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 方法的结果有着高度的相关性。国际上已经推荐使用V2.0试剂盒。

2.2.2 信号放大扩增试剂和性能

Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA（分枝状DNA探针杂交微孔板捕获比色分析法）, 利用分枝状DNA多级信号放大原理。无需RNA纯化和PCR扩增步骤。离心浓缩病毒子并用去垢剂和蛋白酶K消化病毒释放病毒RNA，仪器测定。扩增靶核酸位置是pol基因区，扩增HIV-1基因亚型是M组的A-H亚型，检测线性范围是50～500，000 RNA 拷贝/毫升；使用六个外部定量标准品，1个阴性、1个弱阳性和1个强阳性外部外部质控品。每次可检测12的整数倍样品。

以上试剂均可使用EDTA和ACD作为样品的抗凝剂，NucliSens HIV-1 QT和NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1以及Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA试剂还可以使用肝素作为抗凝剂。如果必须使用经肝素处理的血浆样品进行RT-PCR扩增，则必须在样品中直接加肝素酶消化肝素。

2.2.3 实时荧光定量PCR技术

实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值）。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。

实时荧光定量PCR扩增的实验检测过程可分为：（1）样品制备,抽提和浓缩目标RNA分子，并除去可能存在的抑制因子。（2）Real-time PCR，检测PCR的产物使用荧光标记的寡核苷酸探针。检测的原理基于荧光信号增长曲线与循环数相关。（3）RT-PCR反应，病毒RNA利用逆转录酶将RNA逆转录为cDNA，然后通过DNA聚合酶对特定片段进行扩增。（4）扩增产物的检测，基于检测阈值的设定，当病毒载量高时，低循环数即能检测到荧光信号，当病毒载量低时，高循环数时才能检测到荧光。循环数与样品载量成线性关系。利用标准品制作循环数与载量的标准曲线就能对样品载量进行定量检测。 使用集合核酸扩增检测技术和方法，利用核酸检测方法的高度敏感性，对高度怀疑感染人群且抗体阴性的样品进行集合核酸检测，可及时发现窗口期感染者。该方法较单份样品的核酸检测具有更高的成本效益。

3.1 样品集合程序

3.1.1 根据预处理样品量，计算预形成一级和二级集合数量，在登记表格上记录一级和二级集合及对应的原始样品编号。

3.1.2 吸取130mL样品，移入标记二级集合的离心管中；10份样品形成一个1300mL的二级集合样品，充分涡旋震荡混匀。

3.1.3 从5个二级集合管中分别吸取210mL样品，移入标记有一级集合的离心管中，形成由50份样品1050mL体积组成的一级集合样品，充分涡旋震荡混匀。

3.1.4 从每个一、二级集合管中吸取500mL集合样品，分装至另一相应标记的离心管，用超敏感核酸检测试剂进行检测。

3.1.5 制备阴性集合外部质控品：使用50份HIV抗体和核酸阴性样品，按上述步骤，分别集合成5个阴性二级集合外部质控品和1个一级集合外部质控品。

3.1.6 制备阳性集合外部质控品：从9份HIV抗体和核酸阴性样品和一份至少含有HIV RNA10c/ml阳性样品中，分别移取130mL加入离心管中，形成一个1300mL的阳性二级集合外部质控品。再分别从4个已制备好的阴性二级集合外部质控品和上述阳性二级集合外部质控品中，移取210mL至标记为一级阳性集合外部质控品的离心管中，形成一级阳性集合外部质控品。

3.1.7 一级和二级阴、阳性集合外部质控品分别用于RT-PCR中每一轮一级和二级集合样品的检测。

3.2 集合样品的检测和分解路线

使用商品化核酸检测试剂，应严格按照试剂说明书操作。按照各商品化核酸试剂集合PCR的方案进行检测，集合样品的数量根据各试剂方案操作。方法简述如下：

3.2.1 用HIV RNA RT-PCR超敏检测方法对一级集合样品进行检测，阳性反应的一级集合样品进入下一检测步骤。

3.2.2 用HIV RNA RT-PCR超敏检测方法对所有组成阳性一级集合的二级集合样品进行检测，阳性反应的二级集合样品进入下一检测步骤。

3.2.3 用HIV RNA RT-PCR标准检测方法检测所有组成阳性二级集合样品的的10份单个样品，确定核酸阳性的单个样品。 HIV感染产妇所生婴幼儿在出生后18个月内可应用HIV核酸（DNA或RNA）检测进行早期HIV感染诊断。尽管HIV RNA检测敏感性在感染早期较高（出生后1个月内），但是HIV DNA检测不受母亲围产期抗逆转录病毒治疗和人乳汁中抗逆转录病毒药物以及婴幼儿预防性抗逆转录病毒治疗的干扰而影响早期诊断。另外，考虑母亲血液污染因素，不推荐使用脐带血进行HIV核酸检测。婴幼儿的抗体检测流程和结果判断见第二章（HIV抗体检测）。

4.1 适用范围

未满18个月的HIV感染产妇所生婴幼儿；未满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染者。

4.2 检测程序及结果报告

4.2.1 于婴儿出生后6周（42天）采集第一份血样本（血样本可制备成DBS或EDTA抗凝全血），送检。

4.2.2 若第一份血样本检测呈阳性反应，尽快再次采集第二份血样本进行检测。若两份血样本检测均呈阳性反应，报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阳性”，诊断儿童HIV感染。及时对HIV感染儿童进行追踪和病情监测，将其转介到儿童抗病毒治疗医疗服务机构，并为其提供机会性感染预防等服务措施；若第二份血样本检测呈阴性反应，待婴儿满3个月再次采集血样本进行检测。若第一份血样本检测呈阴性反应，继续提供儿童保健和随访服务，待婴儿满3个月再次采集血样本进行检测。

4.2.3 若婴儿满3个月再次检测呈阴性反应，报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阴性”，按照未感染儿童处理，继续提供儿童保健随访服务；于儿童满12个月时，按照“HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程”（图4），开始HIV抗体检测，最终确定儿童感染状态。若婴儿满3个月再次检测呈阳性反应，尽快再次采集血样本进行检测。第三份血样本检测呈阳性反应，报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阳性”；若第三份血样本检测呈阴性反应，报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阴性”；分别按照前述流程提供相应服务。

4.2.4 不同时间“婴儿HIV感染早期诊断”检测均呈阴性反应的喂哺母乳的儿童，应在完全停止喂哺母乳后的6周和3个月（若6周时检测结果为阳性可尽快）再次采血进行核酸定性检测，进行早期诊断。儿童满18个月后则可直接进行抗体检测。

4.2.5 如果婴儿第一次采血时已满3个月，但未满12个月，则应尽快在不同时间采集两份血样本；同时将两份血样本送检，按照前述流程进行检测。如果儿童第一次采血时已满12个月，则应首先按照“艾滋病感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程”（ 图4）进行HIV抗体检测。若两种不同原理或厂家生产的HIV抗体检测试剂检测结果均为阴性，则排除儿童感染；若HIV抗体检测试剂检测结果呈阳性反应，不能通过抗体检测确定儿童感染状态，则可在不同时间采集两份血样本，按照前述流程进行“婴儿HIV感染早期诊断”检测。如果儿童第一次采血时已满18个月，则应按照HIV抗体检测流程（图1）进行HIV抗体检测，无需进行“婴儿HIV感染早期诊断”检测。

核酸检测是什么意思 艾滋病核酸检测的介绍

1、艾滋病核酸检测包含HIV-1 DNA检测和HIV-1 RNA检测，直击艾滋病病毒的RNA或DNA结构，检测血液中是否存在病毒核酸，诊断有无病原体感染。

2、采用PCR技术，使用分子生物学实验室通用的扩增试剂和自行研究开发设计的复合引物，覆盖常见的HIV毒株，具有很高的灵敏度。

3、使用二次扩增的套式PCR扩增方法，提高检测的特异性，降低假阳性的概率。

4、核酸检测将艾滋病病毒的检测窗口期缩短至11天，并且核酸检测这项技术可将乙肝、丙肝病毒的检测“窗口期”分别由原来的50天、72天缩短到25天、59天。

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